在本研究中，制备（？）了负载雌二醇的丝素蛋白微球(E2-SF NPs)，并将其嵌入微针(MNs)中，利用微针的缓释作用减少给药频率，同时提高透皮给药的能力。本研究为雌二醇的透皮吸收提供（？）了一条新的途径？
（作者不确保以下内容的真实性和可行性，不提供任何医疗建议，以及从来不承诺下面所有的内容是真实发生过的且不保证符合医学伦理。以及不建议进行学习和任何形式的模仿。）
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1 绪论
1.1研究背景
目前，随着某些条件的不断收紧，缺乏稳定的hrt药物来源是社区内亟待解决的问题之一。目前，社群内已出现部分自制hrt药物的现象，比如自制酒精喷雾，酒精凝胶，使用原料药混合淀粉、硬脂酸镁等辅料压片自制等。而目前来看，口服药片吸收差，需要肝脏进行代谢，具有首过效应；而喷雾、凝胶等方法需要经过皮肤吸收。皮肤吸收的吸收效率低，同时不同人群皮肤敏感程度不同，吸收药物的能力也不同。因此，本文试提出一种透皮吸收方式，即使用搭载雌二醇（E2）的微针阵列（MNs）进行透皮给药。
透皮给药是指药物经由皮肤吸收后进入全身血液循环并达到有效血药浓度，从而实现疾病治疗或预防的一种给药方式。传统的透皮给药以凝胶、皮肤贴剂为主要手段，这有利于长期给药。但由于皮肤角质层的屏障作用，导致药物对皮肤的渗透性较差，使得仅很小一部分药物分子能穿透皮肤，因此难以达到治疗疾病的有效药物浓度。肌肉注射可以让药物在肌肉之间的细胞外基质进行吸收，但是肌肉注射疼痛感强且危险性大，未经培训的人员操作时极其容易造成医疗事故。
微针阵列是一种新型的透皮给药方式。它的特征尺寸在微米量级，通过刺穿皮肤角质层到达真皮层，但不触及痛觉神经，可降低痛感，促进药物通过微孔道渗透微针阵列的应用克服了某些药物通过口服易于分解而活性降低的缺陷。常见的微针分为固体微针、中空微针、涂层微针、可溶性微针、溶胀微针等。其中，溶胀微针在刺入皮肤后不会立刻溶解，而是吸水溶胀，达到缓慢释放药物的效果。常用的制备溶胀微针的材料有水凝胶材料。水凝胶是具有三维网络结构的聚合物，具有良好的生物相容性和亲水性，可在液体中膨胀至其原始体积的几倍。选用水凝胶作为微针基材，可以增强微针的力学强度，使其具备更好的刺入性能。同时，水凝胶微针刺入皮肤后，吸收皮肤中的组织间质液发生溶胀，通过自由扩散释放实心微针内部负载的药物，从而实现药物的缓释功能。
其中，丝素微针阵列生物相容性好，可以保持药物的活性，机械强度及药物释放速率可调，还可以实现药物的靶向投递。同时，再生丝素蛋白具有获取价格便宜，方法简便，便于操作，制备使用试剂无毒性等特点——在家里就可以完成再生丝素蛋白溶液的制备。而再生丝素蛋白制备水凝胶也是作者的研究课题，因此这里选用丝素蛋白作为微针阵列的材料。
由生物高分子制备的微球是一种可负载药物和实现药物缓释的载体，近年来也得到了研究人员广泛的要求。而既然前面用了丝素蛋白，这里再引入其他材料制作微球会增加成本和操作步骤。同时这又是作者的研究课题之一，因此此处选用丝素蛋白微球来负载药物。
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2 负载雌二醇-丝素蛋白微球的丝素蛋白微针的制备
2.1 引言
微针（MNs）是一种新的透皮给药平台，可以有效突破角质层的屏障，增加药物的透皮吸收效率。关于雌二醇直接负载在微针内，作者已经做过有过相关的实验。众所周知的是，雌二醇属于疏水性药物，能溶于酒精、DMSO、甲醇，难溶于水。溶解于酒精的雌二醇加入体积比1/5的水就会变成悬浊液。而水凝胶微针制备需要在水溶液中进行，雌二醇在水溶液中的稳定时间太短，难以维持到溶液成胶便堆积在微针针尖底层，影响微针成型。因此，寻找一个将疏水性药物负载到微针上的方法是制备微针需要解决的问题之一。已有先例证实，将疏水性药物姜黄素溶解在酒精里，随后使用溶解姜黄素的无水乙醇诱导丝素蛋白形成微球，丝素蛋白在形成微球时会将药物负载到微球上。同时，作者也进行过雌二醇负载苯胺，随后在酸性条件下进行原位聚合和掺杂，形成近红外光响应的纳米复合物的相关实验。因此，此处我们选择使用酒精溶解雌二醇，随后用溶解雌二醇的酒精来制备丝素蛋白微球。
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2.2 实验部分
2.2.1 实验仪器与材料
蚕茧（购自淘宝），无水碳酸钠（AR），碳酸氢钠（AR），电饭锅（购自淘宝），溴化锂（AR）或无水氯化钙（AR），无水乙醇（AR），透析袋，透析夹，电子天平，各种容量烧杯，磁力搅拌器，超声清洗机，雌二醇（购自1688）
2.2.2 负载雌二醇的丝素蛋白微球的制备
2.2.2.1 丝素溶液的制备
取3g碳酸钠和1g碳酸氢钠溶解于1000ml水中，称量5g蚕茧，剪成小块放入上述溶液中，在任意能烧开水的洁净容器中煮沸半小时，完成一次脱胶。重复2-3次后，取出脱胶的蚕丝，晾干或烘干备用。一般地，蚕茧中丝素蛋白的含量在75%左右。
称量33.2952g无水氯化钙，加入35.0ml乙醇和43.2ml水中，按照物质的量1:2:8配置三元溶液。或配置9.3-9.8mol/L的溴化锂溶液40ml。
将脱胶后的蚕丝在60℃水浴下放入三元溶液或溴化锂溶液中溶解，保持60℃搅拌孵育1h。随后将溶液放入离心机中8000r离心10min除去溶液中杂质，取上层清液，即得到丝素蛋白-三元溶液或丝素蛋白-溴化锂溶液。
将含有其他离子的丝素蛋白溶液使用9000-14000的透析袋透析3-4天，即得纯净的再生丝素蛋白溶液。
2.2.2.2 负载雌二醇的丝素蛋白微球的制备
取透析后的丝素蛋白溶液，放入100g/L PEG-10000溶液中通过透析进行浓缩。透析袋体积缩小至原来的1/3-1/4时取出透析袋，收集浓缩后的丝素蛋白溶液，通过干燥称量测定浓缩后的丝素蛋白固含量。取浓缩后的丝素蛋白，分别配置2%wt.和3%wt.的丝素蛋白溶液。
取16.5ml的乙醇，加入255mg雌二醇，搅拌、超声溶解。配置得溶解有雌二醇的乙醇溶液。
取8ml2%wt.的丝素蛋白溶液，缓慢搅拌，按照乙醇：丝素蛋白6:20的体积比逐滴滴加2.4ml无水乙醇。滴加完毕后继续缓慢搅拌五分钟，最终得到类似牛奶的白色均匀浑浊液体。随后将滴加后的混合液体转移到离心管中，冷冻48h。取5ml的3%丝素蛋白溶液，按照8:20的比例重复上述步骤，制备丝素蛋白微球。
2.2.3 丝素蛋白微针的制备
2.2.4 体外释药？生物相容性实验？血药？
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我看痴了。
（我看傻了）